密度梯度离心法提取细胞培养上清液中的外泌体
制备不连续的碘克沙醇梯度 ↓ 从管底向上依次加入稀释好的碘克沙醇溶液 3 mL 40%(w/v)、3 mL 20%(w/v)、3 mL 10%(w/v)和2.5 mL 5%(w/v) ↓ 外泌体溶液加到梯度的顶部，在4℃条件下,100 000×g离心18 h ↓ 将离心后的液体从上向下开始分馏，根据1 mL/管，分成13管 ↓ 在4℃条件下，100 000×g 离心60 min，取沉淀 ↓回收外泌体层，用2 mL PBS重悬,4℃，100 000×g再次离心2.5 h ↓PBS重悬沉淀物即为纯化的外泌体 |
附:制备40%(w/v)、20%(w/v)、10%(w/v)和5%(w/v)梯度碘克沙醇溶液，配制方法见表2-1。
4种梯度碘克沙醇溶液的配制比例
渐变层 | 密度(g/mL) | 体积(mL) | 碘克沙醇(%) |
1 | 1.223 | 3 | 40 |
2 | 1.127 | 3 | 20 |
3 | 1.079 | 3 | 10 |
4 | 1.054 | 2 | 5 |